X染色體失活（偏移）實驗

       X染色體失活（偏移）實驗原理和方法簡介（DDX3X基因）

         DDX3X基因位于染色體Xp11.4， 編碼保守的含662個氨基酸的DEAD-box RNA解旋酶（DEAD-box RNA helicase 3），在細胞轉錄、剪接、RNA轉運和翻譯等過程中起重要作用。X染色體上基因的半合子突變，在男性X連鎖遺傳病中總是表達，女性因存在2條X染色體，因此，另一條正常等位基因的補償或因大多數細胞中的突變X染色體失活（偏移，Skewed X inactivation）而通常不受或輕度受影響。DDX3X基因位于X染色體可以逃逸X染色體失活區域（Escape X-chromosome inactivation），是能夠逃逸X染色體失活的基因之一，其基因突變導致的遺傳病通常在女性患者中有顯著的變異性，大多數逃逸X失活的轉錄本并未從失活的X染色體中完全表達，這意味著逃逸通常是部分性的和不完整的。表型嚴重程度可受女性DDX3X基因表達量的影響，即可能會受到偏移X染色體失活或逃逸不完全的影響。X染色體DDX3X基因座單倍體不足可能在男性中是致命的，因此多數患者為女性。

                                                                                                                    X染色體失活（偏移）實驗流程：                                    

  限制性內切酶HpaII和 HhaI切基因組DNA，沒有甲基化的X染色體被切開，甲基化的失活X染色體不能被切開→ PCR擴增沒有切開的失活X染色體→ PAGE (polyacrylamide gel electrophoresis) →  銀染→ Quantity One software半定量分析。

染色體失活（偏移）實驗原理示意圖